表现
吸光度超过仪器线性范围(通常 > 2.0Abs),数据无意义;
吸光度不稳定,持续上升或下降;
吸收峰形状异常(如峰分裂、基线抬升)。
原因
样品浓度过高:超过朗伯 - 比尔定律的线性范围(通常浓度应使吸光度在 0.2-0.8Abs 之间,误差最小);
样品浑浊或有沉淀:悬浮颗粒会散射光线,导致 “假吸光度”(吸光度偏高);
样品不稳定:在测定波长下发生分解、聚合或与溶剂反应(如维生素 C 在紫外区易氧化);
溶剂干扰:溶剂在测定波长有吸收(如甲醇在 200-220nm 有吸收,若样品测定波长为 210nm,会叠加背景吸收)。
解决方法
稀释样品:用空白溶剂将样品稀释至吸光度 0.2-0.8Abs 范围内;
澄清样品:通过离心(3000rpm,5-10 分钟)或过滤(用 0.22μm 滤膜)去除沉淀;
选择稳定条件:若样品不稳定,需现配现测,或加入稳定剂(如抗氧化剂);
更换溶剂:选择在测定波长下透光率 > 95% 的溶剂(如测定 200-220nm 时,用正己烷或水代替甲醇)。