表现
紫外区测定时吸光度异常高;
同一样品在不同比色皿中测定的吸光度差异大;
空白校正后仍有明显背景吸收。
原因
材质选错:玻璃比色皿仅适用于可见区,在紫外区有强吸收;若用于紫外区,需用石英比色皿;
清洁不彻底:比色皿内壁残留样品(尤其是强吸附性物质,如蛋白质、染料),或洗涤剂残留;
比色皿不配对:非成套比色皿的透光率差异大(合格比色皿的配对误差应 < 0.002Abs);
操作污染:用手触摸比色皿的透光面(应握毛面),导致指纹或油污污染。
解决方法
确认材质:紫外区必须用石英比色皿(可通过 “紫外透过率测试” 验证:石英皿在 220nm 处透光率 > 80%,玻璃皿几乎测试” 验证:石英皿在 220nm 处透光率 > 80%,玻璃皿几乎为 0);
彻底清洁:
常规样品:用去离子水冲洗 3 次,再用无水乙醇润洗,倒置晾干;
难清洗样品(如油脂、蛋白质):用 5%-10% 硝酸浸泡 10-30 分钟,再用去离子水冲洗;
筛选配对:取同批次比色皿,装入空白溶剂,在测定波长下测吸光度,选择吸光度差值 < 0.002 的比色皿配对使用。